Прежде чем кандидат в ЛС будет исследован в клинике, его влияние на основные органы и системы организма оценивают в эксперименте на животных. При этом обязательно рассматривают влияние на сердечно-сосудистую, нервную, дыхательную, мочевыводящую, пищеварительную, кровеносную системы и печень. Часто кандидат в ЛС исследуют на предмет взаимодействия с другими медикаментами, которые, благодаря своему специфическому действию или широкому употреблению, вероятно, могут с ним конкурировать.
Любой эффект антагонизма или синергизма должен быть изучен для подготовки рекомендаций и предостережений клиницистам. До начала клинических испытаний устанавливают также ЛС для борьбы с возможными явлениями передозировки данного средства, особенно если его терапевтическая доза невелика, что свидетельствует о принадлежности испытуемого вещества к сильнодействующим препаратам. Следует отметить, что программа испытаний зависит от того, является ли предлагаемое ЛС оригинальным или предполагаются иной путь введения уже известного препарата, принципиально новый подход к дозировке, применение по новому назначению и т.п. Испытания проводятся и в связи с изменениями в технологии синтеза субстанции или вида, состава и/или технологии изготовления ЛФ. Наибольший объем исследований предполагается в случае изучения новой субстанции. Он включает токсикологические, фармакологические, клинические испытания и фармакокинетические исследования. Токсикологические испытания предполагают: изучение острой токсичности на трех видах животных; подострой и хронической токсичности; местнораздражающего, ульцерогенного и кумулятивного действия; экспериментальное лечение отравлений при передозировке; оценку аллергенности, иммунотоксичности, терато- генности, гонадотоксичности, мутагенности и канцерогенности*; выявления возможного развития лекарственной зависимости* (* — при необходимости).
Фармакологический блок исследований включает общую фармакологию и оценку специфической активности по нескольким критериям. Если предполагается регистрация уже известного препарата, но с новым способом введения, то объем испытаний сводится к изучению острой, подострой, хронической токсичности и специфического действия. Любое изменение технологии производства субстанции или ЛФ влечет за собой новый набор биологических испытаний. Особое внимание уделяется условиям проведения токсикологических исследований. Они должны удовлетворять международным требованиям по надлежащей лабораторной практике — Good Laboratory Practice (GLP), которые регламентируют условия содержания животных (рис. 14,4), требования к обслуживающему персоналу, ведению документации, планированию эксперимента, контролю полученных результатов и т. п [7, 8]. Впервые эти правила были предложены в 1976 г. в США управлением по контролю качества продуктов и медикаментов — US Food and Drug Administration (FDA); в Японии эта система мер введена в действие в 1983 г. Постепенно требования GLP были приняты и в странах ЕС, В настоящее время, также как и нормы GMP, эта система поэтапно внедряется в Украине. Цели установления правил GLP следующие: • обеспечение качества и согласованности представляемых данных; • единообразие требований к лабораторным помещениям, оборудованию и рабочему персоналу; • составление и соблюдение подробной стандартной методики экспериментальных работ — Standard Operating Procedure (SOP) и порядка проведения испытаний (протокола); • проверка испытаний в ходе их проведения путем создания службы по качественной оценке испытаний — Quality Assurance Unit (QAU); • четкое распределение ответственности отдельных исполнителей испытаний; • точная регистрация данных; • хранение всех данных испытаний, отчетов, препаратов; • контроль за пригодностью учреждения к проведению испытаний. Острая и хроническая токсичность. Токсикологические исследования на животных проводят до того, как потенциальный препарат будет испытан на людях, чтобы отклонить вещества с высокой токсичностью, определить органы-мишени для токсического воздействия и время наступления побочных эффектов. Это означает, что на ранних стадиях клинических испытаний эти системы и органы будут находиться под пристальным контролем. Очень важно установить, является ли токсическое действие обратимым или нет, каков его механизм и, следовательно, можно ли его предотвратить.
Токсикологические исследования проводят на 2—3-х видах животных с учетом специфического эффекта препарата. Они необходимы для подбора доз ЛС (размер, частота и курс приема), повторности курсов и оценки продолжительности клинических испытаний в будущем. Эти показатели являются основными для получения разрешения на проведение испытаний с участием добровольцев. Скандинавские страны, Великобритания, США, Австралия разработали специальные рекомендации, регулирующие длительность воздействия ЛС на человека в зависимости от продолжительности токсикологических исследований. Первоначально исследуют острую токсичность — вредное действие препарата, проявляющееся после его однократного применения или повторного введения через короткие (не более 6 ч.) интервалы в течение суток. Целью эксперимента является определение переносимых, токсических и летальных доз Л В и/или Л С и причин гибели животных. Исследования проводят на 2—3-х видах животных, один из которых — не грызуны. При этом вводят все возрастающие дозы Л В/Л С двумя путями, один из которых соответствует предполагаемому для применения у человека. Эти исследования проводят на небольшом количестве животных, но не менее 5—6 особей в группе. Таким способом определяют ЛД50. Если из-за низкой токсичности вещества определить ЛД50 не представляется возможным, то указывают максимальную дозу, которая была введена. Общая продолжительность наблюдения за животными при исследовании острой токсичности составляет не менее 2-х недель, причем в первый день животные находятся под непрерывным наблюдением. Это позволяет установить максимально переносимые дозы для проведения тестов хронической токсичности, определить разброс доз и идентифицировать органы- мишени. Основная цель изучения субхронической токсичности — определить, как переносится J1C при длительном (2—4 нед.) введении, при том же способе введения, что и рекомендуемый для человека, на двух видах животных (один вид — не грызуны). Обычно испытывают три дозы: минимальную и максимальную суточные, минимальную многократную — терапевтическую.
Общим требованием для испытаний нового J1C в однократной дозе на добровольцах является наличие результатов о токсикологических исследованиях продолжительностью не менее 14 дн. Токсикологические исследования, проведенные в течение 30 дн., позволяют представить вещество для клинических исследований продолжительностью 7—10 дн. Клинические испытания свыше 10 дн. требуют предварительных токсикологических исследований в течение 90 дн. Применение препарата более 6 мес. требует проверки его токсических свойств в течение 12—18 мес. на двух видах животных, один из которых — не грызуны. Для выявления способности у кандидата в J1C вызывать новообразования у человека используется два типа тестов. Первый — кратковременный тест in vitro на генотоксичность — обычно проводится с использованием бактериальных клеток. Долгосрочный эксперимент по проверке канцерогенных свойств продолжается в течение двух лет на большом количестве лабораторных животных (мышах или крысах). Репродуктивная токсикология исследует влияние потенциального препарата на фертильность, фетотоксичность, постнатальное развитие. Перед проведением клинических испытаний с участием женщин репродуктивного возраста необходимо изучить тератогенность на двух видах животных.
Для клинических испытаний на добровольцах мужского пола данные о влиянии на репродукцию не требуются. Такие сведения необходимы, когда препарат предназначен для длительного применения у лиц репродуктивного возраста обоего пола. Метаболизм и фармакокинетика. Эти исследования проводят с целью получения информации о превращениях J1C в организме в зависимости от вводимых доз и путях выведения метаболитов. Оценка метаболизма требует измерения концентрации J1B и его метаболитов в биологических жидкостях и тканях. Чаще всего для этого используют ВЭЖХ или ГЖХ с детектированием УФ, флуориметрическими, масс-спектрометрическими и др. способами. Проблема детектирования стоит особенно остро, когда активность Л В очень высока и его применяют в малых дозах, что приводит к присутствию его в тканях в следовых количествах. В этом случае наиболее информативным может оказаться радиоиммунологический метод. Однако при этом возникает проблема специфичности, т.к. не только сам препарат, но и его метаболиты могут содержать метку. Информация о концентрации J1В и его метаболитов необходима для подтверждения результатов токсикологических экспериментов и подбора оптимальной дозы. При проведении фармакокинетических исследований очень важно на кривой зависимости «концентрация — время» выявить участок, который имеет линейный характер (см. также разд. 7). Установление причин нелинейности, таких как метаболическое насыщение и реабсорбция, способствует пониманию особенностей токсических и фармакодинамических эффектов испытуемого J1C.
Добавить комментарий